CPCs在浆细胞病中的临床应用

• MGUS
  • 患病率：美国50岁及以上为3.2％，70岁及以上为5.3％，85岁及以上为8.9％；中国北京50岁及以上为1.11％，70岁及以上为2.57％
  • CPCs阳性率：21％ - 59％
  • 预测进展：CPCs数量高（≥0.058个／μl）进展至SMM或活动性MM比例更高
  • 共识：诊断和随访时，可在常规检测基础上通过FCM检测CPCs
• SMM
  • 患病率：40岁及以上人群可达0.5％
  • 进展率：诊断后前5年，每年约10％进展为MM
  • 预测进展：CPCs水平升高是独立预后不良因素
  • 新模型：20／2／0.015（sFLCR＞20，M蛋白＞2g／dl，CPCs＞0.015％）
  • 共识：诊断时通过FCM检测CPCs，结合常规检测识别高危患者
• MM
  • 初诊：CPCs高负荷是独立不良预后因素，可完善R - ISS风险分层模型
  • 化疗后：CPCs阳性预示缓解深度不足，与更短EFS和OS期相关
  • auto - HSCT前后：CPCs状态与预后相关
  • 共识：初诊、化疗后、auto - HSCT前后建议通过FCM检测CPCs
• 浆细胞白血病（PCL）
  • 诊断标准：CPCs≥5%是诊断PCL的标准，EuroFlow NGF检测CPCs≥2％的患者可能具有PCL特征
  • 共识：初诊怀疑PCL时通过FCM检测CPCs

FCM检测CPCs的技术要点

• 抗体选择
  • 推荐方案：优先采用CD38、CD138、CD45、CD19、CD56、CD27、cyk和cyλ组成的单管8色检测方案
  • 单抗干扰：应用靶向CD38单抗药物的患者，使用多表位CD38 Me等代替
• 检测灵敏度选择
  • 建议：LOD至少达到10 - 4，有条件实验室可使LOD或LLOQ达到10 - 5或更低
• 样本储存及制备
  • 抗凝：采用EDTA抗凝
  • 检测时间：建议24h内完成检测，尽量不超过48h
  • 标本制备：不建议采用Ficoll密度梯度离心法富集单个核细胞
• 细胞富集及染色流程
  • 外周血计数，取血加PBS，37℃水浴5min，800xg离心5min，吸上清
  • 加红细胞裂解液溶血6min，800xg离心5min，吸上清
  • 加PBS至4ml，转移至流式管，540xg离心5min，吸上清
  • 加胞膜抗体，避光孵育15min
  • 加A液，避光孵育6min
  • 加溶血素，避光溶血10min，540xg离心5min，吸上清
  • 加B液和Kappa、Lambda抗体，避光孵育15min
  • 加PBS 2ml，540xg离心5min，吸上清
  • 加500μlPBS溶液上机检测
• 细胞获取、设门分析及报告要求
  • 细胞获取：控制FSC电压和阈值，减少细胞碎片获取比例
  • 设门分析：圈总浆细胞门时圈入CD38bCD138 - 细胞群
  • 报告要求
    • 以单克隆浆细胞占白细胞百分比报告，白细胞总数含CD45阳性区白细胞和CD45阴性区异常浆细胞
    • 检测结果＞LLOQ：报告异常单克隆浆细胞百分比、数量、白细胞总数
    • 检测结果介于LOD～LLOQ之间：报告异常单克隆浆细胞百分比＜LLOQ、数量、白细胞总数
    • 检测结果＜LOD：报告异常单克隆浆细胞百分比＜LOD、数量、白细胞总数
• 设门分析策略示例
  • 利用CD45／Time选液流稳定区间
  • 通过FSC - H／FSC - A、SSC - H／SSC - A去除黏连体
  • 通过SSC - A／FSC - A去除细胞碎片
  • 圈出CD38＋CD138＋及CD38bCD138 - 细胞群
  • 通过CD45联合SSC圈精确浆细胞群
  • 根据CD56和CD19表达分群
  • 以淋巴细胞中CD19阳性成熟B细胞辅助确定cyKappa和cyLambda分界线
  • 观察细胞群集中程度
  • 圈CD45阳性和阴性浆细胞群，计算白细胞数量

FCM检测CPCs的未来展望

• 检测方法标准化
• 抗体组合持续优化
• cut - off值一致化：同一区域或相近地区医疗机构形成局域性统一值或许可行